革兰氏染色法（Gram Stain）是一种在细菌学中广泛使用的鉴别染色法，由丹麦病理学家汉斯·克里斯蒂安·革兰（Hans Christian Gram）于1884年创立。该方法利用细菌细胞壁上 的生物化学性质差异将所有的细菌分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。
革兰氏染色后的颜色差异
革兰氏阳性菌（G+）：
颜色：通常表现为紫色或蓝紫色。
原因：革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，主要由肽聚糖和磷壁酸组成，肽聚糖含量较高且交联致密。在染色过程中，使用乙醇进行脱水处理后，细胞壁网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘液复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此呈蓝紫色或紫色。
常见菌种：如金黄色葡萄球菌、链球菌、肠球菌、李斯特菌等。
革兰氏阴性菌（G-）：
颜色：通常表现为红色或粉红色。
原因：革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，肽聚糖含量少且交联度差，外膜层类脂含量高。在乙醇脱色处理时，外膜层迅速溶解，薄而松散的肽聚糖不能阻止结晶紫-碘复合物的溶出，因此脱色后呈无色状态。随后用红色染料复染，细菌便呈现红色或粉红色。
常见菌种：如大肠杆菌、霍乱弧菌、脑膜炎双球菌、铜绿假单胞菌等。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤：
初染：使用结晶紫进行初染，使所有细菌都被染成紫色。
媒染：用碘液进行媒染，形成结晶紫-碘复合物，增强染料与细菌的结合力。
脱色：使用乙醇或丙酮进行脱色处理。革兰氏阳性菌由于其细胞壁特性，不易脱色；而革兰氏阴性菌则易被脱色。
复染：用红色染料（如番红）进行复染。革兰氏阳性菌仍保留初染时的紫色或蓝紫色，而革兰氏阴性菌则被染成红色或粉红色。
革兰氏染色成败的关键是脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，因此脱色时间必须严格控制，一般为20~30秒。在脱色过程中需要密切观察细菌颜色的变化，及时调整脱色时间。涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。菌液涂布时应均匀而薄，以确保染色剂能够均匀覆盖每个细菌，从而得到一致的染色效果。
为了避免以上因素对检验效果的影响，现在大多数检测单位引进全自动染色机。全自动染色机能够自动完成染色过程中的多个步骤，如自动固定、染色、干燥等，无需人工干预，大大提高了染色效率。染色机能够控制染色时间、温度和染液浓度等参数，避免了人工染色过程中可能出现的操作失误和误差。
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